本文参考自《分子克隆实验手册》第二版第1.25-1.28页，详细介绍了碱性裂解法质粒小型提取的实验步骤。

实验步骤

1. 在适宜抗生素存在下，过夜培养5 mL细菌培养液。

2. 通过离心收集1.5 mL培养液，置于Eppendorf管中。

3. 用100 μL冰冷溶液1重新悬浮沉淀。

4. 室温放置5分钟。

5. 加入200 μL溶液2，快速颠倒管子两到三次混合内容物，切勿涡旋混匀。

6. 冰上放置5分钟。

7. 加入150 μL冰冷溶液3，倒置涡旋混匀。

8. 冰上放置5分钟。

9. 4°C下离心5分钟。

10. 将上清液转移到新管中，加入等体积酚/氯仿，涡旋混匀，室温下离心2分钟。

11. 将上层液转移到新管中，加入两倍体积乙醇，轻柔涡旋混匀，室温放置2分钟。

12. 4°C下离心5分钟。

13. 去除上清液，加入1 mL 70%乙醇，短暂涡旋混匀后再次离心。

14. 去除上清液，真空干燥沉淀。

15. 加入50 μL含DNase-free胰蛋白酶RNase（20 μg/mL）的TE缓冲液（pH 8.0）。

配方

1. TE缓冲液：50 mM葡萄糖，25 mM Tris-Cl（pH 8.0），10 mM EDTA（pH 8.0）；滤过灭菌，4°C保存。

2. 0.2N NaOH（从10N储液新鲜稀释），1% SDS；使用当日新鲜配制。

3. 3 M钾和5 M醋酸。4°C保存。

60 mL 5 mM钾醋酸盐

11.5 mL冰醋酸

28.5 mL H2O