背景介绍:曲霉菌(Aspergillus)感染是免疫功能低下患者常见的侵袭性真菌感染之一,其抗原半乳糖甘露聚糖(Galactomannan)检测对于早期诊断具有重要意义。本文详细介绍了用于检测该抗原的样本制备流程,旨在提高检测的准确性和可靠性。
样本制备流程:
在无菌层流安全柜(II类)中,用无菌手术刀在培养皿中将组织样本细致切割。切割时应在所有方向(长度、宽度、对角线)均匀切割,以破坏组织纤维,优化抗原的提取效果。将切碎的组织转移至无菌玻璃匀浆器(容量1-5毫升,根据样本体积调整),进行研磨,获得均匀的匀浆液。
加入等体积的无菌纯水,有助于研磨并形成液态匀浆。将匀浆分装至1.5毫升的无菌离心管中,每份约1毫升。用涡旋震荡器震荡30秒,确保样本充分混合。随后,将样本离心(1000g,5分钟),取上清液用于检测。
上清液用无菌吸头转移至新管,按试剂盒说明进行抗原检测分析。
注意事项:由于Platelia检测对抗原浓度极为敏感(1ng/ml),在操作过程中应尽量避免样本接触尘埃和空气,以防污染导致假阳性结果。整个操作应在无菌环境中进行,确保检测的准确性。
所需设备与材料:
- 安全柜
- 无菌培养皿
- 无菌手术刀
- 无菌玻璃匀浆器
- 高纯水(符合检测要求)
- 1.5毫升无菌离心管
- 涡旋震荡器
- 离心机
- 无菌吸头
建议使用无菌、无热源污染的设备,以确保样本的纯净和检测的准确性。操作时应佩戴一次性手套,遵守实验室安全规范。