描述

人前列腺癌细胞系的培养方法

操作步骤

细胞的培养与传代
人前列腺癌细胞系PC3、DU145、JCA1、ALVA31和LNCaP可以在标准的RPMI完全培养基中进行培养（具体成分见下文）。通常，将400,000到500,000个细胞接种在12毫升RPMI完全培养基中，放置于常规的T75培养瓶中，在37摄氏度、7% CO2（5% CO2也可）条件下培养3到4天，直到细胞大约达到80%的融合度。然后，使用胰蛋白酶（5毫升0.1%胰蛋白酶和0.04% EDTA，Sigma T-3924）从表面脱离细胞。细胞用RPMI洗涤一次后，重新接种到新的培养瓶中。

制备液氮中的冻存库
将细胞重悬于含有10% DMSO的胎牛血清（HyClone SH30070.03）中，浓度约为2,000,000个细胞/ml。将1毫升的细胞悬液分装到冷冻管中，并将冷冻管放置在充满异丙醇的冷冻容器中（例如Nalgene）。将冷冻容器在-80摄氏度的冰箱中放置过夜，然后将冷冻管转移到液氮中进行长期保存。

如何将冻存细胞复苏
将解冻的细胞（约2,000,000个细胞）在RPMI完全培养基中洗涤一次，然后将所有细胞接种在12毫升RPMI中，放置于T75培养瓶中，按上述方法培养。

标准RPMI完全培养基的成分
在500毫升的RPMI-1640（GibcoBRL 11875-093）瓶中加入：

5.0毫升青霉素（10,000 U）-链霉素（10 mg）-L-谷氨酰胺（200 mM）溶液（Sigma G-1146）
5.0毫升100 mM的丙酮酸钠（Sigma S-8636）
5.0毫升1 M HEPES（pH 7.0）
0.5毫升2-巯基乙醇溶液（50 mM，下面有制备说明）
50毫升热灭活的胎牛血清（HyClone SH30070.03，56摄氏度热灭活40分钟）

2-ME溶液的制备
将50微升的2-巯基乙醇加入14.2毫升的RPMI（无血清），进行无菌过滤，分装后储存于-20摄氏度。

稳定转染体选择的抗生素浓度
表中的值表示不同细胞系对应抗生素的浓度。括号中的值表示在12毫升RPMI完全培养基中添加的抗生素储备液的体积，其中G418=遗传霉素储备（10 mg/ml，Sigma G-1279），嘌呤霉素储备（50 g/ml，Sigma P-7255），和潮霉素储备（20 mg/ml，Calbiochem 400051）。