实验描述

ELISA（酶联免疫吸附试验）抗体捕获法是一种常用的免疫学实验技术，用于检测特定抗原或抗体的存在。本文详细介绍了该方法的实验步骤。

实验步骤

1. 将蛋白质用PBS稀释至2.5-5 mg/ml，每孔添加100 μl。于4°C过夜孵育或室温孵育1小时。

2. 使用250 μl PBS/1% BSA封闭板，于4°C过夜或室温孵育1小时。

3. 用PBS/0.1% Tween洗板3次。

4. 与第一抗体（100 μl/孔）于室温孵育1小时。（多克隆SCCA抗血清稀释度为10^-4至10^-7）

5. 用PBS/0.1% Tween洗板3次。

6. 与第二抗体（100 μl/孔）于室温孵育1小时。Amersham山羊抗兔-HRP（#NA934）稀释度为1/2000；Bio-Rad和Jackson Labs山羊抗鼠-HRP稀释度为1/2000至1/3000。

7. 用PBS/0.1% Tween洗板3次。

8. 每孔添加50 μl显色试剂，孵育5-8分钟。辣根过氧化物酶的显色试剂 - Abbott OPD试剂盒（#6172-30）。

9. 使用1.25 M H₂SO₄（69.4 ml 36N H₂SO₄和930.6 ml H₂O）250 μl/孔终止反应。

10. 在492 nm波长下读取吸光度。