新蝶呤(D-erythro-neopterin)属于蝶啶类化合物,由鸟苷三磷酸(GTP)在GTP-环水解酶I的作用下在单核细胞和巨噬细胞中生成。新蝶呤主要由活化的巨噬细胞分泌,可以通过免疫测定法在血清、血浆和其他体液中检测。
ELItest新蝶呤测试的原理是基于酶免疫测定(EIA),利用未标记的新蝶呤与酶标记的新蝶呤(新蝶呤/碱性磷酸酶结合物)竞争抗新蝶呤抗体的结合位点,形成的抗原-抗体复合物被固相化。通过洗涤去除未结合的成分后,加入底物溶液启动酶反应,碱性磷酸酶催化4-硝基苯磷酸盐生成黄色4-硝基苯酚。反应停止后,通过微孔板读数器在405nm波长下测量光密度值,该值与样本中新蝶呤的浓度呈反比。
新蝶呤测定的临床应用包括:监测HIV感染者、作为HIV感染者抗病毒治疗效果的替代指标、筛查捐献的血液和骨髓以避免HIV传播、检测HIV阳性母亲所生的婴儿、监测移植受者的排斥反应等。
测试步骤包括:
1. 将标准品、对照品和血清样本加入未涂层微孔板。
2. 加入酶结合物,混合后转移至涂层微孔板。
3. 室温下避光孵育2小时。
4. 洗涤微孔板以去除未结合的成分。
5. 加入底物溶液,孵育30±10分钟。
6. 加入终止液停止反应。
7. 在405nm波长下测量光密度。
结果计算:通过绘制标准曲线来确定样本中新蝶呤的浓度。质控措施包括使用内部对照、重复测试部分样本以及参加国家间的实验室能力验证计划。
预期值:健康个体的新蝶呤水平通常小于10 nmol/L。