反应细胞频率测定（RCF）是一种通过在淋巴细胞增殖试验（LPA）中添加极限稀释步骤来测量病原体特异性记忆CD4细胞频率的方法。与LPA相比，RCF是一种定量测量方法。此外，RCF对每个细胞稀释度使用24个重复，这减少了试验的技术变异性。RCF已被证明与个体对抗疱疹病毒的免疫状态相关。

分离的PBMC被洗涤、计数并重悬于RPMI 1640培养基中，该培养基补充了1%的抗生素和10%的人类AB血清（刺激培养基）。含有100,000、50,000、25,000和12,500个PBMC的24个重复培养物分别用CMV和模拟感染的对照抗原刺激8天。在培养的最后一天，细胞被脉冲标记3H胸腺嘧啶0.25 Ci/ml，持续6小时，然后收获，并在闪烁计数器中计数掺入的放射性。反应细胞频率的计算方法如Henry等人所述。反应孔定义为其cpm超过相同细胞浓度的对照模拟抗原刺激培养物的平均值+3 SD cpm的孔。非反应孔的百分比以对数刻度绘制，而每孔细胞数以线性刻度绘制，RCF在37%非反应孔频率处进行插值。RCF表示为检测一个CMV特异性增殖细胞所需的平均PBMC数量。该方法的动态范围在1/12,500至1/100,000细胞之间。

所需材料包括5 x 10^6个PBMC、RPMI 1640（含谷氨酰胺）、热灭活的人类AB血清、青霉素/链霉素抗生素溶液、CMV或VZV抗原和对照、96孔圆底板、3H胸腺嘧啶等。实验步骤包括制备板、实验设置和收获、计算等。