描述

预先用lac Z构建体转染的细胞可进行β-半乳糖苷酶活性染色。该实验通过检测β-半乳糖苷酶水解X-Gal产生蓝色产物，从而标记表达lac Z基因的细胞，广泛应用于基因表达、细胞谱系追踪及转染效率评估等研究。

实验步骤

1. 用2 ml PBS溶液（见提示2和3）洗涤细胞2至3次。

2. 吸去上清液。

3. 向35 mm培养皿中加入1 ml 0.2%戊二醛。

4. 室温孵育5分钟。

5. 吸去戊二醛，用2 ml PBS溶液洗涤细胞2次（见提示3）。

6. 吸去PBS溶液，加入β-半乳糖苷酶染色液（每35 mm培养皿1 ml，见提示4）。

7. 在37°C、5% CO2的湿润培养箱中孵育2小时至过夜（见提示5）。

8. 阳性细胞应在2小时内染成蓝色（从深蓝、宝蓝到浅蓝）。在染色液中孵育3至4天后可能出现背景染色。

9. 吸去上清液，用PBS洗涤。

试剂配方

500 mM 铁氰化钾（注意：见提示1）

500 mM 亚铁氰化钾（注意：见提示1）

X-Gal溶液（注意：见提示1）

用二甲基甲酰胺配制，20 mg/ml X-Gal

0.2%（v/v）戊二醛溶液（电镜级），用PBS配制（注意：见提示1）

PBS（pH 7.2）：137 mM NaCl，2.7 mM KCl，4.3 mM Na2HPO4，1.8 mM KH2PO4

β-半乳糖苷酶染色液（2 ml）：20 μl 铁氰化钾，20 μl 亚铁氰化钾，100 μl X-Gal溶液，1.856 ml PBS，混匀，在通风橱中现配现用。

1 M MgCl2

提示

1. 注意！该物质为生物危害品，请查阅其MSDS获取正确操作指南。

2. 务必包含未转染lac Z构建体的对照组细胞。

3. 某些细胞类型（如NIH-3T3、BALB/C-3T3或形态转化细胞）在第二次洗涤后容易脱落。若未在吸去前离心沉淀细胞，可能丢失这些细胞。

4. 过度固定（如延长固定时间或增加戊二醛浓度）会降低信号。

5. 若在标准烘箱中孵育，培养皿会变干。