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快速转化:大肠杆菌化学感受态细胞的简易转化方案

2005-07-18 00:00 Mike Benedik (U of H 未知 阅读 0
核心摘要: 本文介绍了一种快速的大肠杆菌化学感受态细胞转化方案,仅需5分钟操作,无需热激或SOC培养基,适用于超螺旋质粒DNA的转化。步骤简单:冰上孵育DNA与感受态细胞3-4分钟,直接涂布于含抗生素的LB平板,室温至37℃培养18-24小时即可。该方法由Mike Benedik提供,适合常规质粒扩增,但不推荐用于连接反应。

在分子生物学实验中,我们经常需要将质粒/构建体转入不同的大肠杆菌菌株中进行扩增或其他操作。这里介绍一个简单的五分钟转化方案,适用于超螺旋DNA(如小量制备的质粒DNA)的转化,但不推荐用于连接反应产物的转化。

操作步骤

1. 取一管化学感受态细胞(商业或自制均可),置于冰上融化(最少可用10 μl)。
2. 加入0.5 μl或更少的小量制备质粒DNA(浓度约50 μg/ml即可),冰上孵育3-4分钟。
3. 将混合物直接涂布或划线于预热的含抗生素的LB固体培养基平板上(室温至37℃均可)。
4. 在室温至37℃下培养18-24小时。无需SOC培养基,无需热激。

所需材料

感受态细胞、小量制备质粒DNA、含适当抗生素的固体培养基。

提示

此方法简单快捷,适用于常规质粒转化。对于连接产物或低效率转化,建议使用标准的热激或电转化方法。

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