染色体改构复合物(BAF)与转录因子在基因转录调控中的协同作用
染色体改构复合物(BAF)和转录因子(NF1/CTF)是基因转录调控中的关键参与者。本研究利用Jurkat细胞、HeLa细胞和小鼠脾T淋巴细胞,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫共沉淀、免疫荧光共定位和免疫电镜双标记等技术,探讨了BAF复合物与转录因子NF1/CTF及RNA聚合酶II在基因转录活动中的相互作用。
研究发现,在自主增殖的Jurkat细胞核中,BAF复合物和转录因子NF1/CTF均存在。进一步实验表明,未经ConA激活的小鼠T淋巴细胞中,BAF复合物和NF1/CTF表达水平较低,而激活后表达量显著增加,提示其与细胞活化和基因转录活动密切相关。
免疫共沉淀实验证实,在活化的小鼠脾T淋巴细胞和Jurkat细胞中,BAF复合物的核心亚基BRG1、NF1/CTF和RNA聚合酶II紧密结合。免疫荧光共定位分析显示,BRG1和RNA聚合酶II大亚基以及BRG1和NF1/CTF存在显著共定位,而NF1/CTF与RNA聚合酶II大亚基的共定位现象不明显。免疫电镜双标记实验进一步证实了BAF复合物与RNA聚合酶II及NF1/CTF之间的紧密联系。
此外,研究发现肌动蛋白作为BAF复合物的亚基,可与BRG1、NF1/CTF和RNA聚合酶II结合,其中与BAF复合物和RNA聚合酶II的联系更为紧密。
结论:BAF复合物、转录因子NF1/CTF、RNA聚合酶II和肌动蛋白在转录活跃的细胞中共同参与基因转录起始复合物的形成。BAF复合物与RNA聚合酶II大亚基直接相互作用,通过NF1/CTF的N末端与NF1/CTF相连,而NF1/CTF则直接与RNA聚合酶II小亚基B6结合。