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利用RNA测序技术完成炭疽杆菌基因组转录组分析

2009-03-31 11:36 冯卫东 科技日报 阅读 0
核心摘要: 美国乔治亚理工学院科学家利用RNA测序技术成功解析了炭疽芽孢杆菌的完整转录组,实现了对5000多个基因表达和调控的高分辨率观察。该研究克服了传统方法只能逐个基因分析的局限,为细菌基因调控研究提供了新工具,并有望推动抗生素发现和微生物工程设计。

美国乔治亚理工学院科学家采用一种称为RNA测序(RNA-seq)的新技术,成功描绘了炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)的基因表达图谱。该研究成果发表在最新一期《细菌学期刊》(Journal of Bacteriology)网络版上,标志着任何细菌的转录组(即细菌表达不同基因时产生的完整信使RNA集合)自此可被全面定义,并为研究细菌如何调控基因表达提供了前所未有的细节。

乔治亚理工学院光电系统实验室的研究人员指出,细菌的基因组测序已相当普遍,但要更深层次地定义其转录组却是一项艰巨任务。传统方法只能一次一个基因地确定转录的结构和丰度,即使对研究最广泛的物种,完整转录组的解析也遥不可及。RNA测序方法使科学家能够克服传统局限,以极高分辨率观察B型炭疽基因组中5000多个基因的表达和调控。

RNA测序方法通过高通量测序技术实现,可同时对数百万个信使RNA(mRNA)进行测序。虽然该方法在2008年已被用于定义一些真核生物的转录组,但难以直接应用于细菌,因为细菌mRNA具有不同的结构,且不易与细胞中的其他RNA(如rRNA、tRNA)分离。

为解决这一难题,乔治亚理工学院与生命技术公司(Life Technologies)的研究人员开发了一套通用程序,使RNA测序适用于任何细菌。他们首先对在不同条件下培养的B型炭疽细胞进行测序,采集了超过2.7亿个序列“标签”(每个标签对应一个RNA分子的短片段),然后利用自制的定制软件工具将这些标签拼接成完整的转录组。

研究人员表示,这些数据整合后,可以清晰看到基因组的转录结构,即转录区域与非转录区域之间的明确边界,这代表了个别转录本的起始和终止位点。这些转录边界精确指示了调控基因表达的序列位置,而这些调控序列是其他方法难以发现的。

此外,RNA测序本质上是一种高通量计数技术,能够定量测定细胞中转录本的丰度。该方法在测量基因表达时比传统的微阵列技术具有更高的灵敏度。将细菌基因组中每个基因的结构和丰度信息相结合,研究人员可以更合理地开展抗生素发现和微生物工程设计等工作。

(来源:科技日报 冯卫东)

(《细菌学期刊》(J. Bacteriol.),doi:10.1128/JB.00122-09,Karla D. Passalacqua,Nicholas H. Bergman)

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