高效液相色谱仪（HPLC）是一种广泛应用于化学分析和生物医学研究的精密仪器。其常规分析操作步骤及注意事项如下：

1. 流动相准备：根据分析需求选择合适溶剂，使用色谱纯试剂，水需用20 MΩ·cm去离子水。过滤流动相，选用适当孔径滤膜（如0.45 μm或0.22 μm）。抽滤后超声脱气10-20分钟，去除溶解气体，避免气泡干扰检测。脱气后小心操作，防止气泡重新混入。

2. 系统启动与连接：打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接流动相管道和检测系统。进入控制界面主菜单，点击“manual”进入手动操作界面。

3. 冲洗泵和进样阀：若长时间未使用或更换流动相，需先冲洗。冲洗泵时，在泵出水口用针头抽取。冲洗进样阀时，在manual菜单下点击“purge”，再点击“start”，流速不超过10 mL/min。

4. 调节流速与基线监测：初次使用新流动相时，先测试压力。流速越大压力越高，通常不超过2000 psi（约13.8 MPa）。点击“injure”（应为“inject”），选择合适流速，点击“on”运行，观察基线稳定情况。

5. 设计走样方法：点击“file”，选择“select users and methods”可调用现有方法。建立新方法时，点击“new method”，选择所需配件（进样阀、泵、检测器等），然后点击“protocol”。完整方法包括：a) 进样前稳流（2-5分钟）；b) 基线归零；c) 进样阀的loading-inject转换；d) 走样时间（依样品而定）。

6. 进样与后处理：选定方法后点击“start”。所有样品需经0.45 μm或0.22 μm滤膜过滤。进样后，方法运行完毕点击“postrun”记录数据。全部样品完成后，用相同方法走一段基线冲洗系统。

7. 关机与记录：先关闭计算机，再关闭液相色谱仪。填写使用登记本，由负责人签字。

注意事项：

• 流动相必须色谱纯，水用高纯去离子水。脱气后避免剧烈振动。
• 色谱柱脆弱，首次运行新方法时，先不连接柱子，待系统稳定后再接柱。
• 所有过柱液体必须严格过滤，防止颗粒物堵塞色谱柱。
• 系统压力不宜过高，通常不超过2000 psi，以免损坏色谱柱或仪器。