125I标记单克隆抗体技术概述

同位素标记是一种重要的抗体标记技术，1977年Yalow等因在放射免疫测定法方面的突出贡献而获得诺贝尔生理学或医学奖。单克隆抗体（McAb）标记同位素后，除了应用于放射免疫测定外，还可用于竞争结合试验、体内肿瘤定位等领域。

原理

氯胺-T（对甲苯磺酰氯胺钠）在水溶液中生成次氯酸，是一种温和的氧化剂。当将其加入到含有蛋白质和碘的弱碱性水溶液中时，可将I₂氧化为I⁺，并使其结合到氨基酸上。如果标记条件温和，标记后的McAb仍能保持良好的结合活性。通过测定放射性同位素的强度，可以反映相应抗原的含量。

方法

1. 在细胞冻存管中加入纯化的McAb 100μg/100μl。
2. 再加入10μl 0.05M磷酸缓冲液。
3. 加入10μl（含1mCi）¹²⁵I。
4. 加入10μl氯胺-T（5mg/ml溶于0.05M磷酸盐缓冲液），孵育时间不超过30秒。
5. 加入100μl偏重亚硫酸钠（1.2mg/ml溶于0.05M磷酸缓冲液）。
6. 加入200μl KI溶液（少量KI结晶溶于0.05M磷酸缓冲液 + 4%牛血清白蛋白）。
7. 使用PD10柱（Sephadex G25）除去游离的¹²⁵I，用4% BSA PBS洗脱。
8. 分部收集，每管0.5ml。
9. 每管取5μl进行γ计数，计算标记抗体的比活性和标记率。

标记率（%）=（结合于McAb的¹²⁵I放射性强度（cpm）/总放射性强度（cpm））×100%
比活性（μCi/μg McAb）= 结合于某一管McAb上的放射性强度 / 某一管McAb总量

试剂和器材

1. 纯化后的McAb
2. 0.05M磷酸缓冲液，氯胺-T，偏重亚硫酸钠，KI，BSA
3. ¹²⁵I
4. 具有通风装置的超净台，γ计数仪
5. PD10柱（Sephadex G25）

注意事项

1. 严格防止同位素污染，工作人员必须穿戴工作服、口罩、帽子和手套。所有操作必须在通风橱或通风超净台中进行。操作前后需对实验室环境进行监测。所用¹²⁵I和标记物应妥善保管。
2. 如果标记细胞因子、激素等，应选用更为温和的标记方法，以保持其更好的生物学活性。