Northern blot技术是一种用于检测特定RNA分子的实验室方法。该技术涉及RNA的分离、电泳转移和杂交等步骤。

经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳是Northern blot的第一步。这种方法最初由McMaster和Carmichael于1977年提出。含有乙二醛-DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳，因为前者泳动速率较慢，而且需要循环电泳液以避免电泳过程中形成过高的H+梯度。尽管两种凝胶具有近乎相等的分辨率，但用含乙二醛-DMSO的凝胶对RNA进行分级分离，通常Northern杂交所显示的RNA条带更为锐利。

具体步骤如下：

1. 在灭菌的微量离心管内，混匀下列液体：6mol/L乙二醛 5.4μl，DMSO 16.0μl，0.1mol/L磷酸(pH7.0) 3.0μl，RNA（多达10μl）5.4μl。市售乙二醛通常为40%溶液（6mol/L）。由于接触空气后乙二醛易于氧化，所以使用前需通过混合床树脂进行去离子处理，直至溶液pH值大于5.0为止，然后可分装在小份，用盖紧的小管贮存于-20℃。每小份乙二醛溶液只用1次，剩余液体应予丢弃。

2. 将微量离心管盖严，将RNA溶液置于50℃温育60分钟后，用冰水浴冷却样品，离心5秒钟，使管内所有液体沉降至管底。

3. 于50℃温育RNA溶液的同时，灌制琼脂糖水平凝胶，用1.4%琼脂糖分析1kb以下的RNA样品，而用1%琼脂糖分析1kb以上的RNA样品。用0.1mol/L磷酸钠（pH7.0）配制凝胶缓冲液，降温至70℃，加入碘乙酸钠固体至终浓度为10mmol/L（使RNA酶失活），再降温至50℃，制胶，加入RNA样品前至少放置30分钟使其凝固。

4. 将RNA样品冷却至0℃，加入4μl灭菌的并经DEPC处理的凝胶加样缓冲液，随后立即将上述样品加至凝胶加样孔。用已知大小的乙醛酰RNA作为分子量标准参照物，如18S和28S rRNA或9S兔β-珠蛋白mRNA。

5. 将凝胶浸入10mmol/L磷酸钠电泳液中，以3-4V/cm电压降进行电泳，同时对磷酸钠溶液进行持续再循环，使溶液pH值维持在可被接受的限度内。

6. 电泳结束后，切下分子量标准参照物的凝胶条，浸入溴化乙锭溶液中染色30-45分钟。在凝胶上放置一透明尺，在紫外灯下拍照每个RNA条带至加样孔的距离，以RNA片段大小的lg对数值对RNA条带的迁移距离作图，用所得曲线计算从凝胶移到固相支持体后通过杂交检出的RNA分子的大小。

7. RNA从凝胶转移至硝酸纤维素滤膜或尼龙膜。转移方法包括毛细管洗脱法、真空转移法和电印迹法。

杂交和放射自显影步骤如下：

1. 用预杂交液进行预杂交，时间1-2小时。

2. 在预杂交液中加入变性的放射性标记探针，继续温育16-24小时。

3. 用1xSSC、0.1%SDS于室温洗膜20分钟，随后用0.2xSSC、0.1%SDS于68℃洗膜3次，每次20分钟。

4. 用X光片进行放射自显影，附加增感屏于-17℃曝光24-48小时。