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标签主题:L. pennellii

学术索引

粘粒文库大规模制备方案

本文详细描述了L. pennellii粘粒文库的大规模制备方案,包括从细菌培养、质粒提取、纯化到最终DNA重悬的完整步骤。该文库使用MboI部分消化的基因组DNA构建,连接至双元载体T04541,适用于植物转化研究。步骤中涉及碱裂解法、PEG沉淀、酚氯仿抽提等经典分子生物学技术,为实验室大规模制备粘粒DNA提供了可靠参考。...

2005-07-18 213 0

粘粒文库构建与筛选:从滴度测定到阳性克隆鉴定

本文详细描述了利用粘粒载体构建植物基因组文库并进行筛选的完整实验流程,包括滴度测定、涂板、菌落复制到硝酸纤维素滤膜、变性中和处理、放射性探针杂交、阳性克隆识别及第二轮筛选。该文库基于L. pennellii构建,使用MboI部分酶切DNA,连接至双元载体T04541。步骤涵盖从菌液稀释到最终获得单个阳性克隆的全过程,适用于植物基因组研究。...

2005-07-18 205 0

利用PCR筛选粘粒文库的详细实验方案

本文详细介绍了利用PCR技术筛选L. pennellii粘粒文库的实验方案,包括文库构建背景、引物设计、超级池PCR筛选、阳性池滴度测定、菌落分区筛选及单克隆鉴定等步骤。该方法避免了菌落杂交的高背景问题,适用于快速高效地分离目标粘粒克隆。...

2005-07-18 226 0

粘粒文库制备与甘油菌种保存方法

本文详细描述了L. pennellii粘粒文库的构建与甘油菌种保存方法。文库通过MboI部分消化基因组DNA,选取15-30 Kb片段连接至双元载体T04541,该载体具有植物筛选标记NPTII和细菌四环素抗性。步骤包括从培养皿收集菌落、制备甘油菌种并保存于-80°C,同时比较了DNA斑点杂交与PCR分析的效果。适用于分子生物学和植物遗传学研究。...

2005-07-18 181 0
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