简介
细胞周期的G1/S期阻滞是一种常用的细胞同步化技术，广泛应用于细胞生物学、肿瘤研究及药物筛选中。通过调控细胞在特定周期阶段的停滞，可以实现细胞的同步培养，为后续的实验提供基础条件。本方法主要利用药物Aphidicolin抑制DNA复制，从而阻滞细胞在G1/S交界处。
操作步骤
- 预同步细胞：将细胞在血清饥饿条件下培养，利用低血清培养基（含20 mM HEPES，0.5%的胎牛血清，抗生素）将细胞培养至70%融合状态，连续培养2天，以使细胞进入G0静止期。
- 激活细胞周期：用含有4 g/ml Aphidicolin的完全培养基（含10%胎牛血清、抗生素）替换培养基，培养14小时，使细胞重新进入S期。也可将指数生长期的细胞加入Aphidicolin，培养24小时以实现同步。
- 洗脱药物：用PBS（pH 7.2，含2.7 mM KCl和4.3 mM Na2HPO4）冲洗细胞，去除Aphidicolin，然后用无药物的完全培养基（含抗生素和血清）培养细胞，细胞将同步停留在G1/S交界处。同步状态可通过流式细胞仪结合碘化丙锭染色检测。
所需试剂和培养基
- 低血清培养基：含20 mM HEPES、0.5%（v/v）胎牛血清、100单位/ml青霉素、100 μg/ml链霉素、DMEM培养基
- PBS：pH 7.2，含2.7 mM KCl和4.3 mM Na2HPO4
- 完全培养基：含10%（v/v）胎牛血清、抗生素（青霉素和链霉素）、DMEM
注意事项
药物Aphidicolin的浓度和作用时间应根据不同细胞系优化，某些细胞对药物敏感性不同，可能需要调整培养条件。此外，细胞培养基也应根据细胞类型选择相应的配方，以确保实验效果和细胞健康。