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中国学者首次成功建立抗HBV末端蛋白杂交瘤细胞系

2006-01-27 21:29 赵玉红 第四军医大学 阅读 0
核心摘要: 第四军医大学赵玉红等通过原核表达HBV末端蛋白免疫BALB/c小鼠,成功建立三株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系,为HBV早期诊断和生物治疗提供新工具。

日前,第四军医大学基础部免疫学教研室赵玉红实验师等,采用经原核表达的乙肝病毒末端蛋白(HBV-TP)免疫BALB/c小鼠,通过取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合克隆,成功获得了三株能稳定分泌抗体的抗HBV末端蛋白杂交瘤细胞系,分别命名为E3mAb、F5mAb和F7mAb。这一成果为HBV感染的早期诊断及乙肝患者的生物治疗提供了重要基础。

乙肝是由HBV感染引起的全球性传染病,易于慢性化,并与肝癌的发生发展密切相关。近年来,PCR检测技术虽广泛应用,但因局限性无法作为病毒感染的早期指标。因此,研究HBV多聚酶单克隆抗体(mAb)在HBV相关肝脏疾病诊断中的应用,建立抗HBV末端蛋白杂交瘤细胞系,成为国内外关注的热点。

研究人员采用经原核表达的HBV-TP免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,接种培养。通过筛选和克隆化,应用ELISA法检测出8个阳性克隆,经扩大培养和反复克隆后,精确筛选出阳性率达100%的3个克隆细胞。这3株杂交瘤细胞系在100天连续培养中,mAb分泌持续稳定,冻存复苏后仍保持抗体分泌能力。其染色体数为99~116条,均有端着丝粒及标志染色体(中着丝粒染色体),DNA含量高于SP2/0细胞。分泌的mAb分别命名为E3mAb、F5mAb和F7mAb。免疫组化染色显示,培养上清抗体效价为1:100,腹水为1:1000,相应抗原在乙肝病毒及肝硬变组织中呈高表达(80%),而在正常肝组织中未见阳性反应,抗原主要分布于细胞质内。这表明三株杂交瘤细胞分泌的mAb具有特异亲和性,分泌稳定,特异性强。

据赵玉红介绍,HBV-POL抗原及抗体可在多数HBV感染患者血清中出现,尤其在其他HBV血清学指标阴性的个体中,可能是唯一反映HBV感染或低水平复制的重要标记物。该研究获得的3株杂交瘤细胞系表明,阻断HBV-POL基因编码的末端蛋白TP,对乙肝防治具有重要应用意义,为以HBV-TP为靶蛋白的主动性免疫治疗及基因治疗奠定了基础。

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