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细菌冻干保存技术指南

2006-07-24 14:11 泉水 生物行 阅读 0
核心摘要: 本文详细介绍了冻干细菌的实验步骤,包括培养细菌、杀死细菌、收集和洗涤细胞、冻干细胞以及储存冻干细胞等步骤,为实验室保存细菌提供了实用的技术指南。

冻干是一种保存细菌等微生物的常用方法,可以在长期保存过程中保持细胞的活性和稳定性。以下是冻干细菌的详细步骤:

步骤1:培养细菌

将待冻干的细菌接种到200毫升含有适当抗生素的L-肉汤培养基中。

在37°C下剧烈振荡(200-250 rpm)培养过夜。

步骤2:杀死细菌

向培养物中添加2毫升(1/100体积)甲醛溶液,在37°C下旋转培养1小时以杀死细胞。

步骤3:收集和洗涤细胞

将100毫升培养物分装到两个250毫升离心瓶中,通过7000 rpm、4°C离心15分钟收集细胞。

用100毫升(1倍体积)无菌1x PBS重悬细胞沉淀,然后再次离心收集细胞。

步骤4:冻干细胞

将每个细胞沉淀重悬于10毫升(1/10体积)无菌1x PBS中,并合并到一个50毫升锥形底聚丙烯离心管中。

将管内容物在-70°C下冷冻约1小时,直到完全冻结。为了最大化表面积以便于冻干,将管子倾斜冷冻。

将冻结的管子(盖子松开)放入玻璃冻干容器中,将容器连接到冻干机上,在真空下干燥直到完全干燥(可能需要几天时间)。

步骤5:储存

将紧密盖紧的管子在4°C下保存于含有干燥剂的拉链塑料袋中。

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