冻干是一种保存细菌等微生物的常用方法,可以在长期保存过程中保持细胞的活性和稳定性。以下是冻干细菌的详细步骤:
步骤1:培养细菌
将待冻干的细菌接种到200毫升含有适当抗生素的L-肉汤培养基中。
在37°C下剧烈振荡(200-250 rpm)培养过夜。
步骤2:杀死细菌
向培养物中添加2毫升(1/100体积)甲醛溶液,在37°C下旋转培养1小时以杀死细胞。
步骤3:收集和洗涤细胞
将100毫升培养物分装到两个250毫升离心瓶中,通过7000 rpm、4°C离心15分钟收集细胞。
用100毫升(1倍体积)无菌1x PBS重悬细胞沉淀,然后再次离心收集细胞。
步骤4:冻干细胞
将每个细胞沉淀重悬于10毫升(1/10体积)无菌1x PBS中,并合并到一个50毫升锥形底聚丙烯离心管中。
将管内容物在-70°C下冷冻约1小时,直到完全冻结。为了最大化表面积以便于冻干,将管子倾斜冷冻。
将冻结的管子(盖子松开)放入玻璃冻干容器中,将容器连接到冻干机上,在真空下干燥直到完全干燥(可能需要几天时间)。
步骤5:储存
将紧密盖紧的管子在4°C下保存于含有干燥剂的拉链塑料袋中。