首页 | 家园 | 百科 | 下载 | 书库 | 仪器 | 展会 |人才 | 公司 | 网址 | 问答 | 论坛 | 注册 | 通行证登录 | English

生物行

生物行   进展 | 摘要 | 人物 | 医药 | 疾病 | 技术 | 健康 | 能源   生物航   供应 | 求购 | 公司 | 展会 | 要发布
论坛   神经科学 | 神经系统疾病 | 实验技术 | 求职招聘 | 器材试剂 | 文献检索 | 读书笔记 | 考试招生 | 软件使用
当前位置: 主页 > 生物资源 > 考研考博 > 笔记 >

<<实验动物学>>(7)

时间:2005-12-30 20:56来源:Internet 作者:bioguider 阅读:

[NextPage]


    裸鼠接种成活的肿瘤对化学药物的敏感性与临床所见十分相近。如对黑色素瘤DTIC和CCNU的抑瘤作用较强,而5-FU则无效,与临床客观疗效结果相似。人的Burkitt 淋巴瘤裸鼠移植后对环磷酰胺有较高的敏感性,也与临床结果相符。已证实乳腺癌、结肠癌、肺癌等多种肿瘤模型对药物的敏感性均与人相同。又如,用中成药天花粉治疗移植于裸鼠的人绒毛膜上皮癌,也证实了天花粉可以抑制绒癌的生长,并且可以延长裸鼠带瘤时间和其存活时间。利用裸鼠移植瘤进行化疗,可以针对肿瘤不同组织类型合理用药。实验证实各种抗癌药物对裸鼠移植人癌的疗效与临床上的疗效之间有一定的平行关系,完全可用移植人癌裸鼠模型抗癌结果来预测临床疗效。由于裸鼠价格昂贵,故用于临床抗癌药物筛选并未广泛使用。
    裸鼠也适合于做放射治疗实验研究。肿瘤对放射线的感受性在人和裸鼠是一致的。如将肺燕麦细胞癌移植于裸鼠对其放疗3000 rad照射,3只裸鼠有2只治愈。放射增敏剂(Iq7611)与放射合用对裸鼠移植人肠粘膜腺癌的肿瘤抑制率与肿瘤生长延迟均有明显的作用。
    移植于裸鼠的肿瘤仍保持肿瘤的激素依赖性,因而为研究激素依赖性肿瘤的治疗提供了模型。例如人的乳腺癌MCF-7属雌激素受体阳性,在裸鼠体内仍保持着肿瘤的雌激素依赖性,一旦注入雌激素,立即开始生长,用抗雌激素药物,则有明显的抑瘤作用。
    2. 裸鼠在微生物学和免疫学方面的应用:裸鼠由于功能性T淋巴细胞缺损,免疫机能低下,是研究病毒、细菌感染机制的极好模型动物。如淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV),病毒经脑内接种于无本病毒感染的正常小鼠,可引起脑膜炎,感染细胞被当作靶细胞而遭到攻击,脑、脊髓内出现明显的细胞免疫反应。但在T 细胞缺陷的裸鼠所见却完全相反,未导致动物死亡,仅出现持续的病毒血症,体内不出现LCMV抗体,也无任何免疫反应。
    生物制品(疫苗、菌苗)的安全性和免疫原性是制品必不可少的检查内容,这涉及制品是否有潜在致癌性、感染因子以及它的毒力是否有返祖的可能性。在这些方面裸鼠是很好的实验动物模型和手段。
    3. 在遗传学上的研究和应用:近代遗传学的迅速发展,在人类已经发现40 余种免疫缺陷与遗传因素有关,很多报导仅介绍了这些疾病的实验室检查结果及临床表现,而有关发病机理则停留在假说阶段,主要原因是由于没有与人类所患的免疫缺陷性疾病相对应的自发性实验动物模型,无法通过患病动物来观察疾病发生与发展的全过程,从而无法阐明其遗传规律。裸鼠的遗传因素,因遗传背景的不同,所表现的细胞免疫反应和实验室检查指标亦各不相同。这些裸鼠种群是研究人类各种免疫缺陷性疾病发病机理和遗传规律的动物模型。
    4. 在临床医学上的研究和应用:裸鼠已广泛应用于基础医学研究,目前,临床医学研究也开始应用裸鼠。如神经外科学,利用裸鼠异种移植离断后的神经,观察离体后的神经元的生物学特征。眼科学应用裸鼠眼内注射视网膜母细胞瘤,观察瘤细胞破坏视网膜全过程,研究视网膜屏障与该肿瘤的发生、发展关系,用以指导临床治疗。
第八节  遗传质量检测 

    一、意义
    遗传检测主要指实验小鼠的遗传检测。自从实验小鼠作为一种研究工具,人们已创造了许多实验品系,这些品系现已分布在世界各地。封闭群、近交系、同类系、重组近交系和突变系的总数估计在500种以上,由于这些品系的世界性分布,其中又产生了许多亚系,而在同品系的亚系之间,往往又存在许多潜在性的遗传差异,某些亚系可以携带或多或少已经改变了的基因组,而又保留着原来的命名。因此,当人们利用同一个品系进行实验时,可能得不到相同的结果,人们又常常会把这不同的结果归罪于环境、试验条件,而没有人认识到它是一种遗传上的原因。
    近交系小鼠遗传检测的意义就在于按照小鼠标准化命名委员会的标准审核近交系,把一切改变的等位基因予以剔除。
    远交群遗传检测的目的在于保持遗传上的稳定性,即在一个群体内所有基因的基因频率的比例始终保持不变,从而贮藏现存的遗传杂合性。
    二、遗传改变的原因
  (一)近交系基因改变的原因
    1. 一个外来的基因组杂交进一个近交系, 由于这种杂交所产生的遗传污染不仅仅是一个基因位点,污染程度远远超过基因突变或遗传杂合性的出现,它的发生也不是间断的逐渐积累发生的变化。这种污染多见于几个品系,特别是几个白化品系饲养在一起时,如果饲养员未经过训练、素质差,则加剧这种污染的发生。
    2. 残余的杂合性  尽管我们采用严格的兄妹交配, 近交系在某些位点上仍保留残余的杂合性。这是基于20对染色体、基因组总长度2500分摩(cM)兄妹交配或亲子交配60代,基因组完全纯合子的概率达99%以上,仍有部分基因未纯合,还有一个值得考虑的因素就是杂合子遗传型的个体在受精率、繁育率和生活力上均超过纯合子个体,故它易于繁衍和扩大。
    3. 遗传突变  现代科学证明遗传突变主要来自DNA序列的变化,这种变化可能是某核苷酸的置换、缺失或插入,从繁育体系上看,突变只有发生在代表血统的那些个体上,突变才能真正起作用。
    (二)远交群基因改变的原因:同近交系一样,遗传污染和基因突变都能造成远交群的差异,但远交群等位基因分布改变的主要原因在于选择,要保持一个远交群所有基因频率的相对比例没有变化,最恰当的核心繁育群应有1000个动物,但事实上我们不可能做到这一点,特别是近代,人们为了控制微生物污染,采用剖腹产和悉生生物学技术定期地重建新的群体,在重建过程中,群体骤然变小,近交系数必将上升,因而导致杂合性下降,这也意味着某些基因被固定。在不同的单位这种对位点的不同固定往往导致了同一品种动物等位基因分布的改变。
    三、遗传检测的条件
    (一) 检测内容
    1. 生化位点标志基因检测
    2. 免疫学检测  包括混合淋巴细胞试验,H-2基因和多价抗血清反应,皮肤移植等方法。
    3. 形态学检测  包括下颌骨形态分析法和染色体分带技术等。
    4. 毛色基因测试法
    以上几方面的方法实际上不可能全部采用,但也不能以单一的方法作为依据,应从生化标志,形态学和免疫学等方面综合判断一个品系的遗传概貌是否发生改变较为妥善。
    (二)检测用动物
    在进行基因检测时,应尽量做到检测频率低,抽样少,效率高。
    1. 检测核心群用鼠2-4只,每年一次或必要时测二次,效率高。
    2. 检测扩大群用鼠50只左右,一般每十个月测一次,效率高。
    3. 检测生产群用鼠远多于50只,要求半年测一次。可见工作量大,即不经济, 效率又低。
    下面就几个重要和易于普及的遗传学检测方法进行必要的讨论。
    四、遗传学检测方法
    (一)  生化位点标志基因测试法:生化位点标志基因检测常使用醋酸纤维素膜电泳技术。将待检标本(血清、肾匀浆等)点样,走电泳,显色。然后分析得到的电泳图谱,确定各待测位点的基因型,然后把这些基因型与各品系标准基因型对比,列出相同与不同的基因位点。从而判断被检测品系的纯合程度。
    (二)小鼠皮肤移植法
    小鼠皮肤移植是纯系动物遗传质量控制的基本方法之一,其方法简单,操作方便,可靠性好,值得推广。小鼠与人类在其相应的染色体上有控制移植成活的一组基因位点,组成了主要组织相容性复合体(MHC)或主要组织相容性系统(MHS),小鼠的MHC称为H-2复合体,位于第17条染色体,决定小鼠的主要组织相容性抗原(相当于人的HLA系统)。
    小鼠组织相容性基因位点已知有56个,如H-1、H-2、H-3……H-56。 由于组织相容性基因是共显性的,所以能单独在杂合中表达。各组织相容性位点的抗原具有不同强度的抗原性。小鼠的H-2位点是强抗原,引起对同种移植物产生强的排斥反应,使移植的皮肤约在十一天内被破坏。其余的H位点都是弱抗原。又称为次要组织相容性抗原, 这些位点对同种异体的移植物仅能导致延缓的排斥,这种排斥作用有的可维持长达百天左右。
    移植可分为不同类型
    1. 自体移植  在同一个体上的不同部位之间进行移植。 如小鼠背部腰椎两侧的皮肤左右互换移植,由于受体能识别移植物的抗原是自身的,故不能产生免疫反应,因此移植物能长期存活。
    2. 同种移植  即同一种属动物个体之间的移植,根据遗传基因的差异又可分为:
    ①同系移植(同基因)  纯系动物的特点之一就是基因型一致,这是皮肤移植成功的重要的基础,所以受体的移植物抗原与供体完全一致,不产生排斥反应。
    ②同种异系移植  同样都是小鼠,但不是一个品系,其基因型不同,这样的活组织移植必将引起受体的特异性免疫反应,移植物只能短期生长,最终必遭受体的排斥。
    ③同种近交系F1移植  F1的任何一个亲代的组织移植给F1小鼠都能生长。因为 F1中带有双亲的各一半等位基因,故不产生免疫反应;反之,F1仔鼠的组织移植到亲代则发生排斥,因为双亲的基因型不同。
   (三)毛色基因测试法
    1. 基本原理:小鼠的毛色等位基因A、B、C、D、分别位于第2、4、7、9、 条染色体上。A、B、C、D基因对其相应的a、b、c、d等位基因是显性;而C基因又是其它色素基因的上位基因,当cc隐性基因存在时,细胞内缺乏酪氨酸酶而不能合成色素,因此不论其它控制色素生成的基因是什么,小鼠均表现为白化。小鼠毛色表现型与基因型的关系是,“A-B-C-D-”为野生色;“A-bbC-D-”为桂皮色;“aaB-C-D-”为黑色;“aabbC-D-”为棕色;“-- -- cc --”为白化。所以根据遗传学原理,使复隐性等位基因的小鼠与待测小鼠交配,能从其F1仔鼠的毛色推测被检小鼠的基因型。
    2. 方法
    (1)已知复隐性等位基因型小鼠的选择     可选用纯系DBA/2小鼠, 它的基因型是“aabbCCdd”。
    (2)待测鼠  可以是白化小鼠,亦可是其他颜色的小鼠。 但一般都选用近交系作为待测鼠,以达到了解近交系毛色基因纯合程度或新培育品系的基因型之目的。当然还可用非近交系作为对照组,以观察其毛色基因分离情况。
    (3)交配方式  选用70 日龄左右的已知复隐性基因的雄性小鼠和同样条件的待测雌性小鼠,按1:1或1:2,自行交配,观察并记录交配、生产等时间和各数据,以便于结果分析。
    3. 结果判断标准
    (1)F1仔鼠的毛色为同一颜色者,即可判断被测品系毛色基因纯合。
    (2)同窝F1仔鼠不能少于7只,每个品系每次测试,其仔鼠的观察数目不应少于10只。
    (3)同窝F1仔鼠内若出现两种以上毛色者即说明被测小鼠已发生基因污染和变异。
    (四)基因型的判断
    1. F1代为同一毛色时待测小鼠基因的判断  因为F1代只有一种毛色,所以, 也只能有一个基因型,这样首先可以肯定待测鼠的基因为纯合,然后推导待测鼠基因型。例如用DBA/2测BALB/C毛色基因型。DBA/2×BALB/C的F1代为桂皮色,基因型为AabbCcDd;与已知DBA/2(银灰)的aabbCCdd基因型配对比较,可知F1中A,b,c,D 四个等位基因来自BALB/C,又因为F1只有一种桂皮色,故可以推断该待测BALB/C的毛色基因为纯合, 基因型为AAbbccDD。
    2. F1代为不同毛色时待测小鼠的基因型判断  F1 代毛色不同则说明待测鼠的基因型不纯,故不是纯系动物。那么它的基因型怎样确定呢?方法是把所有F1代的毛色基因型与已知基因型对比,找出与已知基因型不同的基因,然后把它们按序排列即为待测鼠的基因型。
    (四)下颌骨形态分析法:动物的骨骼形态具有高度的遗传性,而各种骨骼的形态、大小及其出现的差异均可作为鉴定品系的方法。Green早在1953 年即在研究这方面的问题。现简介下颌骨分析法,20±1g小鼠的头骨经煮沸3分钟以上,并用胰酶于37 ℃消化24小时后用清水洗净,取下颌骨置于L形直角座标板上测量不同骨性标志的长度和高度,将各测量点的值记入表中,计算后与标准置信区做比较, 落在置信区内表示检验合格,落到置信区外的表示不合格。
第三章 实验动物的微生物学、寄生虫学质量控制 
            第一节微生物控制的意义和标准
    在通常条件下饲养的实验动物,生活在微生物的环境中,当动物从母体无菌的子宫产出之后,就立即被周围的微生物所污染。其中有的微生物可能被动物体重新排除( 过路的),有的则栖居在体内,并对宿主的生理代谢、组织形态、 药物的效应以及致癌物的作用等产生较大的影响,从而干扰动物实验的结果。因此, 微生物的存在对实验动物质量产生极大的影响。
    一、不同微生物、寄生虫对实验动物的影响 
    1.人畜共患病微生物:既可危害动物自身,还会传染给饲养人员( 如流行性出血热、狂犬病、布氏杆菌病、沙门氏菌等)。
      2.影响动物健康的动物传染性疾病微生物:虽然不引起人员发病,但可严重影响动物群体健康。如小鼠的脱脚病(ectromelia,又称鼠痘 mouse pox) 是由鼠痘病毒感染引起的烈性传染病,虽不是人畜共患病,但其传播快,使大批动物死亡或被迫全部淘汰,重新引种建群,给科研和生产带来很大的损失。
      有些动物貌似健康,实际上隐性感染某些微生物,如仙台病毒(sendai virus)感染的孕鼠,可使小鼠繁殖力降低,新生仔死亡率增加。潜在感染可使动物机体发生各种(包括反应性、体内代谢、功能等)变化,或导致体内微生物丛失衡。 进而引发显性疾病使实验动物机体发生病变或导致死亡。
      3.影响和干扰实验:  (1)仙台病毒和绿脓杆菌存在时,如把动物用于放射或使用免疫抑制剂实验可引起发病死亡。(2)78年国内某单位声称在实验中分离到28珠乙脑病毒,但经鉴定其中21珠为鼠痘病毒,占75%。
      4.多数细菌对动物无致病作用,并且有益无害。如普通大肠杆菌,乳酸杆菌和多种厌氧菌。而近年来微生态学研究表明,许多正常菌群当遇到内外环境的变化或在实验条件下可发生菌群失调,引发动物疾病。三株口服液(双歧杆菌、乳酸杆菌、粪链球菌),微生态调节剂。

(责任编辑:泉水)
------分隔线----------------------------
发表评论
请自觉遵守互联网相关的政策法规,严禁发布色情、暴力、反动的言论。
评价:
表情:
用户名: 验证码:点击我更换图片
栏目列表
推荐内容
  • 分子生物学笔记

    第一章 基因的结构 第一节 基因和基因组 一、基因(gene) 是合成一种功能蛋白或RNA分子...