描述

本文介绍了一种使用FuGENE 6转染试剂对J774巨噬细胞进行转染的有效方法，该方法与商业说明基本一致。FuGENE 6是一种非脂质体转染试剂，适用于多种贴壁细胞和悬浮细胞，具有低细胞毒性和高转染效率的特点。

步骤

第1天：细胞准备

在转染实验前一天接种细胞。接种密度取决于细胞生长速率和状态，确保实验当天细胞达到50-80%汇合度。对于大多数细胞系，在35 mm培养皿或6孔板中每孔接种1-3×10^5个细胞（2 ml培养基），过夜培养后即可达到所需密度。

第2天：制备FuGENE 6:DNA复合物

在6孔板或35 mm培养皿中，推荐使用以下FuGENE 6试剂与DNA的比例（体积μL:质量μg）：3:2、3:1和6:1。具体如下：

FuGENE 6:DNA比例 | FuGENE 6体积 (μL) | DNA质量 (μg)
3:2 | 3 | 2
3:1 | 3 | 1
6:1 | 6 | 1

复合物制备步骤：

步骤1：在无菌小管中，加入无血清培养基至总体积100 μL，然后直接向培养基中加入3-6 μL FuGENE 6试剂，轻弹管壁混匀。注意：加样顺序至关重要，必须先加入无血清培养基。避免未稀释的FuGENE 6试剂接触塑料表面（除枪头外），以免影响转染效率。

步骤2：向稀释好的FuGENE 6试剂中加入1-2 μg DNA溶液（浓度0.02-2.0 μg/μL），DNA溶液总体积控制在0.5-50 μL。

步骤3：轻弹管壁混匀，切勿涡旋。室温孵育至少15分钟，最长可至45分钟（某些细胞系可达2小时），不会影响大多数细胞类型的转染效率。

转染操作：

步骤4：将步骤3中的复合物逐滴加入细胞中，均匀分布，轻轻摇晃培养皿或培养瓶以确保分散均匀。

步骤5：将细胞放回培养箱，直至进行报告基因检测。注意：检测前无需移除试剂:DNA复合物。若观察到细胞毒性，请参考故障排除部分。对于稳定转染实验，可保留含复合物的培养基直至需要换液。

配方

无特殊配方要求。

耗材

无特殊耗材要求。

提示

1. 确保细胞状态良好，避免使用过度传代的细胞。2. 优化DNA与FuGENE 6的比例以获得最佳转染效率。3. 转染后24-48小时检测基因表达。